Кашель        14 Серпня 2018        430         0

2 нестачі ПЛР на туберкульоз: аналіз крові для діагностики

Зміст

  • 1 Що таке ПЛР?
    • 1.1 Що потрібно для проведення аналізу?
    • 1.2 У чому основа методу?
  • 2 Щаблі діагностування
  • 3 Обов’язково робити ПЛР при туберкульозі?
  • 4 У чому цінність методу?
  • 5 Відео
  • 6 У чому недоліки?
  • 7 Кому показаний аналіз?

Специфічна туберкульозна інфекція багато років присутня в тканинах і структурах людини, а при певних обставинах швидко поширюється по організму за 2-3 місяці. Деколи оптимальний курс лікування вибрати дуже важко з причини запізнілої діагностики та адаптації збудника до багатьох медикаментів.

2 нестачі ПЛР на туберкульоз: аналіз крові для діагностики

Новітня ПЛР діагностика туберкульозу допомагає виявити не тільки розвинулася хвороба, але і сам збудник, коли перші ознаки захворювання ще не з’явилися.

Що таке ПЛР?

Діагностування туберкульозу способом ПЛР з’явилося нещодавно. У 1983 році мікробіолог з Америки Кері Мулліс винайшов процедуру, при якій мікроорганізми стало можливо відновити з біологічного матеріалу за коротким сегменту. Ця робота отримала Нобелівську премію.

ПЛР на туберкульоз – це полімерний ланцюговий процес, при якому відбувається діагностика і виявлення вірусних збудників способом генної інженерії. Методика використовується в імунологічних, мікробіологічних, вірусологічних та біохімічних лабораторіях.

Універсальний метод допомагає лікарям при діагностиці і виявляє інфекційний процес навіть після перших годин зараження, задовго до появи симптомів. Дослідження можливо навіть при маленькій кількості біоматеріалу.

Що потрібно для проведення аналізу?

  • Кілька відрізків ДНК (праймерів), з них починається біологічний синтез;
  • Нуклеотидні з’єднання, основа молекули ДНК або РНК;
  • Фермент полімераза, яка прискорює аналіз ПЛР.

У чому основа методу?

Спочатку з біоматеріалу від людини, що заразилася виділяється сегмент ДНК, за допомогою генно-молекулярних способів біосинтезу далі визначається тип мікроорганізмів, якому належить биофрагмент.

Ця складна реакція займає менше часу, ніж деякі біометоду. ПЛР визначає збудника за кілька годин, при цьому не існує потреби виділяти його з біологічної рідини (мокротиння, спинномозкової або кров’яний середовища), не потрібно довго ростити його на живильному середовищі. Достатньо, щоб досліджуваний матеріал містив нитка ДНК інфекційного збудника.

При проведенні аналізу крові ПЛР на туберкульоз в пробірці штучні шляхом створюється синтез рибонуклеїнових кислот туберкульозної мікобактерії.

Ступені діагностування

Молекулярна реакція способом ПЛР – це нескладна маніпуляція, займає мало часу. Береться необхідний біоматеріал: для визначення tbc використовується кров, харкотиння, промивна рідина бронхів.2 нестачі ПЛР на туберкульоз: аналіз крові для діагностики

  • Спочатку руйнується первинна форма ДНК, роз’єднуються 2 ланцюжка при високій температурі (максимум 98ОС не більше 2 хвилин);
  • Потім проводиться відпал, первинна температура знижується на кілька поділок, виникає зв’язок нитки ДНК з праймером;
  • Наступна стадія називається елонгація, при цьому відбувається біосинтез необхідних молекулярних структур.
  • Для отримання потрібної кількості копій ДНК має пройти від 25 до 30 таких циклів, при цьому отриману кількість мікобактерій легко розпізнається.

    Обов’язково робити ПЛР при туберкульозі?

    Безпосередньо всім пацієнтам з підозрою на ТВЦ проведення ланцюгової діагностики не робиться, так як процедура вимагає використання дорогого обладнання. Не всі державні лікувальні установи дозволяють його придбати, тим більше, що звичні методики діагностування на мікобактерії туберкульозу теж інформативні.

    Сюди відносять:

    • Ретельне збирання анамнезу, опитування хворого;
    • Зовнішній огляд;
    • Туберкулінова проба Манту;
    • Рентгенографічне або флюорографічне обстеження;
    • За потреби комп’ютерне діагностування;
    • Мікроскопічне або бактеріологічне дослідження маска з мокротою.

    ПЛР на туберкульоз робиться виключно тоді, коли немає можливості зробити інший інструментальний аналіз або в складних для діагностики обставин.

    Незважаючи на те, що винайшли безліч методів діагностування, кількість хворих на туберкульоз продовжує зростати. Крім того захворюваність придбала деякі особливості: нерідко спостерігається важка форма хвороби, збільшується число летальних результатів, збудник набуває стійкість наявними хіміопрепаратів.

    Багато людей не бажають кожен рік проходити профілактичний огляд, відмовляються від вакцинації, що веде до збільшення захворюваності. Такі обставини вимагають ефективних та інформативних методів дослідження, доступних для дорослих і дітей з діагнозом tbc. ПЛР має переваги перед іншими діагностичними методиками.

    У чому цінність методу?

    Це новітнє дослідження відмінно себе зарекомендувало. Якщо з ряду причин складно поставити діагноз або в деяких спірних випадках, ПЛР легше виявляє туберкульозну паличку в біологічному матеріалі, ніж інші методи.

    2 нестачі ПЛР на туберкульоз: аналіз крові для діагностики

    • Це швидке дослідження, невеликий відрізок молекули дає можливість поставити точний діагноз за короткий час приблизно за 5 годин, це застосовується в екстрених випадках, наприклад перед невідкладним оперативним втручанням;
    • Дослідження крові на туберкульоз можливо, коли інші методики недоступні або протипоказані – іноді для виявлення збудника tbc доводиться робити безліч Rg-знімків, облучающая доза при цьому занадто велика;
    • Використовуючи полімеразну реакцію можна досліджувати будь-які біологічні рідини на наявність мікобактерії. Наприклад, можна проводити вивчення спинномозкової рідини при туберкульозному менінгіті або сечі при сечостатевому туберкульозі;
    • Метод безпечний, діагностика туберкульозу у дітей за допомогою ПЛР не викликає складності;
    • Спосіб полімерної реакції виявляє туберкульозну паличку при будь-яких формах і стадіях недуги;
    • Наявність у біоматериалі всього декількох бактерій дозволяє побачити присутність мікроорганізмів, так як це чутлива реакція;
    • ПЛР легко діагностує рецидив хвороби.

    Незважаючи на величезну кількість плюсів, всім хворим з підозрою на tbc дослідження не робиться, так як існують і мінуси, їх так само враховують.

    Відео

    Відео — рання діагностика

    У чому недоліки?

    Цей метод діагностики є скоріше виключне, ніж закономірним, для цього є причини. В першу чергу до уваги береться дорожнеча методу. Обладнання коштує дорого, державні поліклініки не мають можливості його придбати з-за високої ціни, але більшість платних лабораторій устаткування мають, аналіз в них робиться.

    Існуючі недоліки:

    • Метод виявляє вбиті бактерії, які загинули після лікування, при цьому ПЛР показує позитивний результат. Відразу після хіміотерапії проводити дослідження немає сенсу, так як результат буде недостовірним;
    • Туберкульозні мікобактерії піддаються мутації, що призводить до неефективності способу, при цьому нитка ДНК не може послідовно синтезуватися.

    Середовище для дослідження повинна ретельно вибиратися, взяття крові або сечі відбувається тільки в тому випадку, якщо є підозра на зараження. Не можна взяти мокротиння для дослідження, якщо підозрюється туберкульоз кісток. У цій ситуації діагностика буде невірною.

    Кров і сеча хворого на туберкульоз для вивчення на ПЛР береться рідко, виявлення хвороби таким способом сумнівно. У цих біосередовищах збудник визначається тільки при сепсисі, або у разі дисемінованого туберкульозу. Локальні форми зустрічаються найбільш часто, при них кров і сеча можуть залишатися без змін. Найчастіше для вивчення береться мокротиння.

    Кому показаний аналіз?

    Більшість хворих направляються на ПЛР-діагностику в суперечливих і складних випадках туберкульозу. Коли медичні працівники видають направлення на дослідження?

    2 нестачі ПЛР на туберкульоз: аналіз крові для діагностики

  • Якщо відбувся контакт з людиною, у якого достовірно поставлений діагноз туберкульозу, але звичайними способами складно провести діагностику;
  • За тих обставин, якщо хворого надати в поліклініку неможливо для рентгенографії або інших досліджень. У такій ситуації легше обстежити за допомогою полімерного методу. Аналіз мокротиння просто доставляється в лабораторію в спеціальній тарі, а результат стає відомий через кілька годин;
  • Перед операцією буває необхідно терміново визначити хворий пацієнт туберкульоз, у цьому випадку показано проведення ПЛР;
  • З-за безпеки способу, можна проводити обстеження вагітної жінки або дитини, при цьому не створюється додаткова рентген-навантаження;
  • Сумнівні результати тесту Манту.
  • Кожен бажаючий може пройти обстеження платно, якщо туберкульоз не підтвердився за допомогою бактеріології та рентгеноскопії. Так трапляється, якщо вогнище в легеневій тканині невидимий на Rg – знімку у прямій проекції, а пацієнт не зміг зібрати мокротиння правильно, але ознаки туберкульозу людину турбують.

    Сучасна ПЦ реакція для діагностики – це запорука успішного лікування, в результаті якого поширеність захворювання знижується. Традиційні способи визначення недуг не завжди дають бажаний ефект.

    Так ПЛР аналіз на сьогоднішній день став одним з надійних і безпечних методів діагностування на ранніх термінах розвитку хвороби.